Conceptos básicos acerca de Pipetas de BRAND ¡Pipetear como un profesional!
La precisión de las micropipetas depende en gran medida de la técnica del usuario. Incluso pequeños errores pueden influir en los resultados, mientras que una manipulación correcta permite obtener resultados exactos y reproducibles. Desde la selección de la pipeta adecuada hasta la técnica correcta: quien comprende las relaciones y trabaja con cuidado domina incluso las tareas más exigentes en el laboratorio.
Con éstos conceptos básicos acerca de Pipetas de BRAND aprenderá cómo funciona una micropipeta, qué tipos existen y cómo utilizarlas correctamente. Además, nuestros expertos ofrecen consejos prácticos y soluciones para aplicaciones exigentes, con el fin de garantizar flujos de trabajo fiables y eficientes en el laboratorio.
¿Cómo funciona una micropipeta?
Nuestra micropipeta Transferpette® funciona según el principio del colchón de aire y, por ello, también se conoce como pipeta de desplazamiento de aire.
El líquido está separado de la pipeta por un colchón de aire. Al accionar el botón de pipeteo, se mueve un émbolo en el interior de la pipeta. El movimiento ascendente y descendente del émbolo genera una presión negativa o positiva que aspira el líquido hacia la punta o lo expulsa nuevamente.
Ventajas:
- pipeteo preciso y exacto
- rápido, flexible y eficiente
- trabajo libre de contaminación
¿Qué tipos de micropipetas existen?
Las micropipetas de BRAND están disponibles como dispositivos manuales (Transferpette® S, Transferpette® pro) o electrónicos (Transferpette® electronic), así como en versiones monocanal y multicanal con 8 o 12 canales.
¿Cómo se utiliza correctamente una pipeta?
Pipeteo estándar / directo
La aspiración del líquido se realiza presionando el botón de pipeteo hasta el primer tope de resistencia, introduciendo la punta en el líquido y dejando que el botón regrese lentamente a su posición inicial.
Para dispensar el líquido, el botón se presiona nuevamente hasta el primer tope de resistencia. Al presionar después hasta el segundo tope (sobre-carrera), se garantiza que el volumen completo se dispense totalmente.
¿Cuándo se utiliza el pipeteo directo?
El pipeteo directo es el método estándar para el que las pipetas están calibradas de fábrica. Generalmente proporciona los resultados más precisos en aplicaciones estándar con soluciones acuosas.
Pipeteo inverso
En el pipeteo inverso, el botón de pipeteo se presiona directamente hasta el segundo tope de resistencia. A continuación, la punta se introduce en el líquido y el botón se deja regresar lentamente a la posición inicial, aspirando un volumen mayor que el ajustado.
Para la dispensación, el botón se presiona solo hasta el primer tope de resistencia, liberando el volumen ajustado. El volumen restante no forma parte del volumen objetivo y se descarta.
¿Cuándo se utiliza el pipeteo inverso?
El pipeteo inverso es especialmente útil para líquidos con propiedades diferentes al agua (por ejemplo, viscosos, volátiles o espumosos), ya que puede mejorar significativamente el resultado del pipeteo.
Nota
Consejos prácticos
Los siguientes consejos prácticos resumen los puntos más importantes para la selección de las puntas adecuadas, la preparación correcta y un proceso de pipeteo limpio.
Pipetas y puntas
En micropipetas, el rango óptimo para obtener la máxima precisión y exactitud se sitúa entre el 30 % y el 100 % del volumen nominal (VN). Para volúmenes inferiores al 30 % del VN, se recomienda utilizar una pipeta de menor capacidad.
La idoneidad de una punta puede evaluarse mediante una prueba de hermeticidad (unidad PLT) y la exactitud volumétrica (véase SOP).
Las puntas que ajustan de forma hermética son esenciales para obtener buenos resultados de pipeteo. Por lo general, los mejores resultados se logran con puntas originales del fabricante de la pipeta (puntas de ensayo utilizadas en la calibración de fábrica). En el caso de puntas con geometrías diferentes, puede ser necesario un ajuste.
Preparación
Se obtienen resultados óptimos cuando la pipeta, la punta y el líquido se encuentran a la misma temperatura. Siempre que sea posible, el líquido debe adaptarse previamente a la temperatura ambiente.
Parte del líquido aspirado se evapora desde la superficie hacia el colchón de aire, reduciendo el volumen disponible para la dispensación. Para saturar el colchón de aire, cada punta recién colocada debe prehumedecerse aspirando y dispensando el líquido varias veces. Según ISO 8655, se requieren al menos cinco ciclos por punta.
¿Cómo se pipetea correctamente?
1. Sostenga la pipeta lo más vertical posible durante la aspiración (máx. 10°). Ajuste la profundidad de inmersión y el tiempo de espera al volumen objetivo y a las propiedades del líquido.
La aspiración del volumen determina cuánta cantidad de líquido puede dispensarse realmente y es especialmente propensa a errores. Una punta sumergida en ángulo modifica la presión hidrostática en la punta y, junto con una profundidad de inmersión incorrecta, puede afectar a la exactitud del volumen. Dependiendo del volumen objetivo, la pipeta necesita más o menos tiempo para aspirar completamente el líquido.
2. Tras la dispensación, retirar la punta rozando la pared del recipiente a una distancia de 8–10 mm.
El volumen objetivo corresponde al volumen completo contenido en la punta. Por ello, debe garantizarse una dispensación total.
Rango de volumen
Profundidad de inmersión [mm]
Tiempo de espera [s]
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Soluciones para aplicaciones o condiciones exigentes
Las pipetas se calibran de fábrica con agua bajo condiciones definidas (ISO 8655) y son ideales para soluciones acuosas. En condiciones diferentes, la exactitud volumétrica puede verse reducida. Para obtener resultados óptimos, se recomiendan pipetas de desplazamiento directo, como HandyStep® touch o Transferpettor de BRAND.
Cuando se utiliza una pipeta de desplazamiento de aire, las técnicas siguientes y el ajuste por parte del usuario (User Adjustment) pueden mejorar los resultados.
¿Cómo puede una pipeta ajustada de fábrica para agua pipetear de forma fiable líquidos con densidad diferente?
Perform a temporary volume compensation via user adjustment.
Background:
Pipettes are factory-adjusted to the density of distilled water. A density that deviates from this (e.g., potassium iodide solution) affects the expansion of the air cushion and thus the liquid volume.
For high-density liquids, the air cushion expands due to the higher hydrostatic pressure and may not aspirate the full volume.
¿Cómo se consigue pipetear líquidos viscosos?
- Pipeteo inverso
- Pipetear lentamente y prolongar el tiempo de espera
- Corrección del volumen mediante el ajuste por el usuario
Antecedentes:
Los líquidos viscosos (por ejemplo, glicerina, aceites) dificultan el pipeteo preciso, ya que su alta resistencia al flujo ralentiza tanto la aspiración como la dispensación. Además, a menudo queda un volumen residual en la punta de la pipeta.
¿Cómo se puede prevenir la formación de gotas al pipetear líquidos volátiles?
- Prehumedecer el colchón de aire al menos 5 veces (saturación del colchón de aire)
- Utilice el pipeteo inverso
- Aplique una corrección de volumen mediante el ajuste del usuario tras un prehumedecimiento suficiente
Antecedentes:
En líquidos volátiles (por ejemplo, etanol), una parte del volumen se evapora hacia el colchón de aire no saturado de la pipeta. Como consecuencia, el colchón de aire se expande y empuja el líquido fuera de la punta. Esto provoca con frecuencia la formación de gotas en la punta de la pipeta.
¿Cómo se puede evitar la formación de espuma al pipetear líquidos espumosos?
- Pipeteo inverso
- Pipetear lentamente
- Las puntas con filtro pueden proteger frente a la contaminación
Antecedentes:
Los líquidos espumosos dificultan el pipeteo exacto y reproducible debido a la formación de burbujas de aire.
¿Cómo se pipetean líquidos con baja tensión superficial?
- Utilizar puntas de calidad
- Pipeteo inverso
Antecedentes:
Los líquidos con baja tensión superficial tienden a humectar las superficies. Esto dificulta una dispensación completa y uniforme del líquido.
¿Cómo deben pipetearse las muestras sensibles a la temperatura si no es posible un equilibrio térmico?
- Cambio de punta tras cada paso de pipeteo
- No prehumedecer el colchón de aire
- Ajuste por el usuario
Antecedentes:
Las diferencias de temperatura entre el líquido, la pipeta y el entorno modifican el colchón de aire y afectan a la exactitud. Por ejemplo, al pipetear un líquido frío, el colchón de aire se contrae en el primer paso de pipeteo, de modo que inicialmente se aspira un volumen excesivo.
Obtenga más información sobre las demás relaciones en nuestra Nota Técnica.
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Nota
Control de equipos de ensayo y mantenimiento
Además de la técnica de pipeteo, una comprobación y un mantenimiento regulares son indispensables para obtener buenos resultados de pipeteo a largo plazo. En el marco del control de equipos de ensayo conforme a las directrices ISO y GLP, los instrumentos de medición volumétrica deben comprobarse periódicamente en cuanto a su exactitud y, si es necesario, ajustarse.
Recomendamos realizar una comprobación volumétrica (calibración) y un mantenimiento al menos cada 3 a 12 meses. El ciclo puede adaptarse a los requisitos individuales.
En las siguientes situaciones debe realizarse un mantenimiento inmediato, independientemente del ciclo de mantenimiento:
- Se ha aspirado líquido al interior de la pipeta
- La pipeta gotea al pipetear agua
- El botón de pipeteo solo puede moverse con dificultad
- La comprobación de hermeticidad mediante la unidad PLT indica una falta de hermeticidad en el Sistema de la Pipeta o unida a la Punta
- Anomalías en la comprobación volumétrica gravimétrica
Encontrará más información sobre el mantenimiento en el manual de instrucciones de su pipeta y en nuestra SOP sobre el control de equipos de ensayo.
Referencias bibliográficas
Informe de expertos DKD-E 8-2 Análisis de los factores de influencia en la calibración de pipetas de desplazamiento de pistón con colchón de aire, edición 05/2013, revisión 0, Physikalisch-Technische Bundesanstalt, Braunschweig y Berlín. DOI: 10.7795/550.20250320
Feldmann, R., Lochner, K.H. Influences on volume in piston-operated air-displacement pipettes. Accred Qual Assur 21, 69–82 (2016). DOI: 10.1007/s00769-015-1171-y
ISO 8655, Piston-operated volumetric apparatus