Les principes de fonctionnement des micropipettes BRAND Pipeter comme un pro!
La précision des micropipettes dépend de manière déterminante de la manipulation de l’opérateur. De petites erreurs peuvent déjà influencer les résultats, tandis qu’une manipulation correcte permet d’obtenir des résultats justes et reproductibles. Du choix de la bonne micropipette à la la façon de manipuler adaptée: en comprenant les différences et en travaillant avec soin, vous maîtriserez ainsi les tâches de laboratoire les plus exigeantes.
Dans ce guide, vous découvrirez comment fonctionne une micropipette, quels types existent et comment les utiliser correctement. Vous trouverez également des conseils pratiques utiles et des solutions pour des applications exigeantes, proposés par nos experts, afin de garantir des flux de travail fiables et efficaces au laboratoire.
Comment fonctionne une micropipette?
Notre micropipette Transferpette® fonctionne selon le principe du coussin d’air et est donc également appelée micropipette à coussin d’air.
Le liquide est séparé de la pipette par un coussin d’air. En actionnant le bouton de pipetage, un piston est déplacé à l’intérieur de la pipette. Le mouvement de va-et-vient du piston génère une dépression ou une surpression, ce qui permet d’aspirer le liquide dans la pointe ou de l’en expulser.
Avantages :
- pipetage précis et exact,
- rapide, flexible et efficace,
- travail sans contamination
Quels sont les différents types de micropipettes?
Les micropipettes de BRAND sont disponibles en versions mécaniques (Transferpette® S, Transferpette® pro) ou électroniques (Transferpette® electronic), ainsi qu’en configuration monocanal ou multicanaux avec 8 ou 12 canaux.
Comment utiliser correctement une pipette?
Pipetage standard/ direct
L’aspiration du liquide s’effectue en appuyant sur le bouton de pipetage jusqu’au premier point de résistance, en immergeant la pointe de la pipette dans le liquide, puis en laissant le bouton revenir lentement à sa position initiale.
Pour la distribution du liquide, le bouton de pipetage est à nouveau enfoncé jusqu’au premier point de résistance.
En appuyant ensuite jusqu’au deuxième point de résistance (course supplémentaire), on s’assure que l’intégralité du volume soit complètement délivrée.
Quand utiliser le pipetage direct ?
Le pipetage direct est la méthode standard, selon laquelle les pipettes sont réglées et étalonnées en usine. Il fournit généralement les résultats les plus précis pour les applications courantes avec des solutions aqueuses.
Pipetage inverse
Lors du pipetage inverse, le bouton de pipetage est enfoncé directement jusqu’au deuxième point de résistance.
La pointe de la pipette est ensuite immergée dans le liquide et le bouton est relâché lentement jusqu’à sa position initiale, de sorte qu’un volume de liquide supérieur au volume réglé est aspiré.
Pour la distribution du liquide, le bouton de pipetage est enfoncé jusqu’au premier point de résistance, ce qui permet de délivrer le volume réglé. Le volume résiduel ne fait pas partie du volume cible et est éliminé.
Quand utiliser le pipetage inverse ?
Le pipetage inverse est particulièrement adapté au pipetage de liquides dont les propriétés diffèrent de celles de l’eau (par exemple visqueux, volatils ou moussants).
Il peut améliorer la précision et la reproductibilité des résultats de pipetage dans ces applications.
Remarque
Conseils pratiques
Les conseils pratiques suivants résument les points essentiels concernant le choix des pointes appropriées, la préparation correcte et un processus de pipetage propre et fiable.
Pipettes et pointes
Pour les micropipettes, la plage de volume optimale offrant la meilleure précision et exactitude se situe entre 30 % et 100 % du volume nominal (VN). Pour des volumes inférieurs à 30 % du volume nominal, il est recommandé d’utiliser une pipette de plus petit volume nominal.
L’aptitude d’une pointe peut être déterminée par la vérification de l’étanchéité (à l’aide de l’appareil PLT Unit) et de la justesse volumétrique (voir SOP).
Des pointes de pipette parfaitement étanches sont essentielles pour obtenir de bons résultats de pipetage. Les meilleurs résultats sont généralement obtenus avec les pointes d’origine du fabricant de la pipette (= pointes de référence utilisées lors de l’étalonnage en usine). En cas d’utilisation de pointes présentant des écarts géométriques, un ajustage de la pipette peut s’avérer nécessaire.
Préparation
Des résultats optimaux sont obtenus lorsque la pipette, la pointe et le liquide sont à la même température. Dans la mesure du possible, le liquide doit être adapté à la température ambiante avant utilisation.
Une partie du liquide aspiré s’évapore depuis la surface vers le coussin d’air, ce qui réduit le volume réellement disponible pour la distribution. Afin de saturer le coussin d’air, chaque pointe nouvellement montée doit être prémouillée. Cela se fait par plusieurs cycles d’aspiration et de distribution du liquide. Conformément à la norme ISO 8655, au moins cinq cycles par pointe sont requis.
Pipetage correct
1. Maintenir la pipette aussi verticale que possible lors de l’aspiration du liquide (max. 10°).
Adapter la profondeur d’immersion et le temps d’attente au volume cible et aux propriétés du liquide. L’aspiration du volume détermine la quantité de liquide réellement délivrée et constitue une étape particulièrement sujette aux erreurs. Une pointe de pipette immergée de manière oblique modifie la pression hydrostatique dans la pointe et, associée à une profondeur d’immersion incorrecte, peut altérer l’exactitude volumétrique. Selon le volume cible, la pipette nécessite plus ou moins de temps pour aspirer complètement le liquide.
2. Après la distribution du volume, essuyer la pointe de la pipette sur la paroi du récipient sur 8 à 10 mm.
Le volume cible correspond au volume total de liquide contenu dans la pointe. Il est donc essentiel de veiller à une distribution complète du volume.
Plage de volume
Profondeur d’immersion [mm]
Temps d’attente [s]
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Solutions pour des applications ou des conditions exigeantes
Les pipettes sont réglées en usine pour l’eau dans des conditions définies (ISO 8655) et sont idéales pour le pipetage de solutions aqueuses.
Dans des conditions différentes, l’exactitude volumétrique peut être réduite. Pour obtenir des résultats optimaux, l’utilisation de pipettes à déplacement positif telles que la HandyStep® touch ou le Transferpettor de BRAND est recommandée. Lors de l’utilisation d’une pipette à coussin d’air, les techniques suivantes, ainsi qu’un ajustage utilisateur temporaire, peuvent contribuer à améliorer les résultats de pipetage.
Comment une pipette réglée en usine sur l’eau peut-elle pipeter de manière fiable des liquides de densité différente?
Compensation volumétrique temporaire par ajustage utilisateur (user adjustment).
Contexte:
Les pipettes sont réglées en usine sur la densité de l’eau distillée. Une densité différente (par exemple une solution d’iodure de potassium) influence la dilatation du coussin d’air et donc le volume de liquide aspiré. En cas de densité élevée, le coussin d’air se dilate davantage, par exemple en raison d’une pression hydrostatique plus élevée, et ne peut alors aspirer le volume complet.
Comment réussir le pipetage de liquides visqueux ?
- Pipetage inverse
- Pipetage lent et augmentation du temps d’attente
- Correction du volume par ajustage utilisateur (User Adjustment)
Contexte:
Les liquides visqueux (par exemple le glycérol ou les huiles) rendent le pipetage précis plus difficile, car leur résistance élevée à l’écoulement ralentit aussi bien l’aspiration que la distribution. De plus, un volume résiduel reste fréquemment dans la pointe de la pipette, ce qui peut affecter l’exactitude volumétrique.
Comment prévenir la formation de gouttes lors du pipetage de liquides volatils ?
- Préhumidifier le coussin d’air au moins 5 fois (saturation du coussin d’air)
- Pipetage inverse
- Correction du volume par ajustage utilisateur (User Adjustment) après une préhumidification suffisante
Contexte:
Lors du pipetage de liquides volatils (par exemple l’éthanol), une partie du volume s’évapore dans le coussin d’air non saturé de la pipette. Cela provoque une dilatation du coussin d’air, qui pousse le liquide hors de la pointe. Il en résulte fréquemment la formation de gouttes à l’extrémité de la pointe de la pipette.
Comment éviter la formation de mousse lors du pipetage de liquides moussants ?
- Pipetage inverse
- Pipetage lent
- Les pointes à filtre peuvent protéger contre la contamination
Contexte:
Les liquides moussants compliquent un pipetage précis et reproductible en raison de la formation de bulles d’air, qui perturbe l’aspiration et la distribution du volume.
Comment pipeter des liquides à faible tension superficielle?
- Utiliser des pointes de haute qualité
- Pipetage inverse
Contexte:
Les liquides à faible tension superficielle ont tendance à mouiller les surfaces. Cela complique une distribution complète et homogène du liquide, car celui-ci adhère plus facilement à la paroi de la pointe de la pipette.
Comment pipeter des échantillons sensibles à la température (froid, sur glace, etc) lorsqu’aucun équilibrage thermique n’est possible?
- Changer de pointe après chaque étape de pipetage
- Ne pas préhumidifier le coussin d’air
- Ajustage utilisateur (User Adjustment)
Contexte:
Les différences de température entre le liquide, la pipette et l’environnement modifient le coussin d’air et altèrent l’exactitude volumétrique.
Par exemple, lors du pipetage de liquides froids, le coussin d’air se contracte pendant l’aspiration, ce qui entraîne initialement l’aspiration d’un volume trop élevé.
Nous avons regroupé les défis typiques du pipetage dans ce guide synthétique. Compact, clair et idéal comme aide d’orientation au laboratoire.
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Remarque
Surveillance des équipements de contrôle et maintenance
Outre la technique de pipetage, un contrôle et une maintenance réguliers sont indispensables pour garantir des résultats fiables à long terme. Dans le cadre de la surveillance des équipements de mesure conformément aux normes ISO et aux directives BPL (GLP), les instruments de mesure volumétrique doivent être vérifiés régulièrement quant à leur exactitude et ajustés si nécessaire.
Nous recommandons d’effectuer un contrôle volumétrique (étalonnage) et une maintenance au moins tous les 3 à 12 mois. La périodicité peut être adaptée aux exigences individuelles et aux conditions d’utilisation.
Une maintenance immédiate doit être effectuée indépendamment du cycle de maintenance dans les situations suivantes:
Du liquide a été aspiré à l’intérieur de la pipette
La pipette goutte lors du pipetage de l’eau
Le bouton de pipetage est difficile à manipuler
Le test d’étanchéité à l’aide de l’unité PLT indique une fuite
Des anomalies sont constatées lors du contrôle volumétrique gravimétrique
Vous trouverez de plus amples informations sur la maintenance dans le mode d’emploi de votre pipette ainsi que dans notre SOP relative à la surveillance des équipements de contrôle.
Références bibliographiques
Rapport d’experts DKD-E 8-2 – Analyse des facteurs d’influence sur l’étalonnage des pipettes à déplacement de piston à coussin d’air,
édition 05/2013, révision 0, Physikalisch-Technische Bundesanstalt, Brunswick et Berlin. DOI : 10.7795/550.20250320
Feldmann, R., Lochner, K. H. Influences on volume in piston-operated air-displacement pipettes.
Accreditation and Quality Assurance 21, 69–82 (2016). DOI : 10.1007/s00769-015-1171-y
ISO 8655, Appareils volumétriques à piston